Z6·尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养操作指南

一、细胞培养条件

本细胞培养需要特定的条件，包括温度、二氧化碳浓度等，详细信息请参阅相关培养手册。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，建议使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后在超净台内进行严格无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以使细胞稳定状态。显微镜下观察细胞生长情况，并进行不同倍数拍照（建议40x、100x及200x各一张）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，若未提供照片默认为收到状态良好。

传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基，以便进行对比培养，换液后请将瓶盖轻松旋松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞未达到80%的汇合度，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS对细胞进行1-2次洗涤。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，若细胞大部分变圆并脱落，迅速轻敲培养瓶，添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞以使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，转移至15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞置于-80℃冰箱中保存，若后期要转入液氮罐，需在-80℃冰箱中保存24小时以上后再转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），快速将其放入37℃水浴中解冻，待冻存管中无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000 RPM下离心5分钟。
3. 弃去上清，加入5ml完全培养基重悬，再接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

由于某些细胞不牢固，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱离数量较多，请将培养瓶中的培养液收集至离心管中，1000 RPM离心5分钟，收集上清作过渡培养。借助胰酶处理后，再进行分瓶传代。

五、售后条款

1. 可重发的情况

1. 细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等情况，可进行重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内反馈真实实验结果，核实后可重发。
3. 常温发货细胞在静置24小时后或干冰发货细胞在复苏后24小时，若大多数细胞存活不良（需提供照片），则可重发。
4. 如在上述条件下遇到细胞污染问题，也可重发。
5. 如细胞活性存在问题，在收到产品7天内提供真实实验结果，经过核实后将进行重发。
6. 在收到细胞的当天及第2、3天内拍照记录，若逾期未反馈，则视为产品合格。

2. 不予重发的情况

1. 因客户造成的细胞污染不予重发。
2. 因客户不正当操作导致细胞状态不佳的情况不予重发。
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳的也不予重发。
4. 如未提供细胞培养前3天的照片，不予重发。
5. 细胞培养时经过其它处理的情况不予重发。
6. 如在收到细胞2天内未反馈的，也不予重发。

如需了解更多信息，请查阅Z6·尊龙凯时相关产品资料，确保您的操作符合标准，保障细胞培养的成功率与应用效果。