本研究探讨了农杆菌在烟草叶片中的注射及其对DgnsLTP1和DgPIP相互作用的影响。为确认这一相互作用，我们实施了双分子荧光互补（BiFC）实验。在此过程中，使用了pCAMBIA1300-YFPn与pCAMBIA1300-YFPc，pCAMBIA1300-YFPn-DgnsLTP1与pCAMBIA1300-YFPc，以及pCAMBIA1300-YFPc-DgPIP作为阴性对照。该实验的结果可能会受到多种因素的影响，特别是在酵母双杂交实验中，BD融合的诱饵蛋白若独立激活，AD融合的靶蛋白如具有特异性DNA结合能力，也有可能独立激活报告基因的表达，导致假阳性结果的出现。

其次，BiFC实验中，目的蛋白与荧光片段的融合可能会影响不同蛋白之间的互作，此外，不同外源基因的瞬时表达效率差异也可能导致假阴性结果。因此，建议在开展BiFC实验之前，评估这两个基因的亚细胞定位和表达效率，以便调整质粒的转化条件。为了获得清晰的实验观察结果，在制片过程中应仔细清理叶片表面杂质，并尽量排除气泡；显微镜观测时，应控制激发光电压，以确保烟草细胞的轮廓清晰可见，且分布均匀。

荧光素酶互补实验与BiFC实验原理相近，前者通过荧光素酶催化荧光素产生的荧光进行验证，后者则是利用荧光蛋白本身的荧光特性来实现验证。需要注意的是，温度对这两种互补实验间互作的影响很大。应对措施包括在室温或更低的温度下培养细菌或细胞，以确保融合蛋白的正常表达；在此后对培养物进行1至2小时的低温处理，或者继续在室温下培养1天。

通常使用绿色荧光蛋白（GFP）或红色荧光蛋白（RFP）作为标记，但不同类型和种类的蛋白可能需要不同的荧光蛋白，以达到最佳的检测和观察效果。因此，必须针对具体的蛋白进行具体分析。

双荧光素酶实验在生命科学研究中发挥了重要作用，为解决多个生物学难题提供了强有力的技术支持。我们致力于提供专业的技术服务，包括双荧光素酶实验、荧光素酶蛋白互补实验（LCA）和双分子荧光互补（BIFC）等。Z6·尊龙凯时将从方案流程设计到技术实验执行，提供全面的科研技术服务与成品试剂盒，期待与您携手合作，共同推动生物医学研究的进步。